【分　 类】 农业与自然
【关 键 词】 波尔山羊羔羊；超数排卵；体外成熟；体外受精
【来 　源】 互联网
【收　 录】 中文学术期刊网

正文：
摘  要：目的：为探索波尔山羊羔羊超数排卵的可行性及体外受精情况。方法：本实验应用四种不同的促性腺组合，对16只7周龄大的波尔山羊羔羊超排，并进行采卵及体外受精。结果：共获得卵母细胞918枚，其中超排处理Ⅰ组到Ⅳ组的可用卵母细胞数分别为49，87，429，293枚，各组间差异显著（0.01<P<0.05）。卵母细胞进行体外培养24 h后与上游法获能的精子体外受精，48 h后各组的卵裂率分别为27%，21%，60.2%，69%，其中CIDR+PMSG+FSH处理组与GnRH+FSH处理组和PMSG+FSH处理组差异极显著（P<0.01）；6 d到10 d各组囊胚率分别为7%，6.5%，18%，13%，PMSG+FSH处理组和GnRH+FSH处理组与CIDR+PMSG+FSH处理组差异极显著（P<0.01）。：结论：结果提示，CIDR+FSH处理组和CIDR+PMSG+FSH处理组能明显提高超排效果和卵裂率、囊胚率。
关键词：波尔山羊羔羊；超数排卵；体外成熟；体外受精
 
The Investigation of In Vitro Fertilization of Boer Goat Lamb’s 0oeytes Obtained from Different Superovulation
Abstract: Objective: In order to investigate the fertilization In Vitro of Boer goat lamb’s ooeytes obtained from superovulation. Method: 16 kids aged 7-weeks-old of Boer goat were superovulated by 4 treatments with FSH, PMSG and/or CRID, and then the follicular ooeytes are recovered from their ovaries surgically. Result: The results show that: 918 follicular oocytes were obtained, and the valuable oocytes are 49, 87, 429 and 293 after the superovulation treatments with different injections respectively (0.01<P<0.05). The ooeytes were fertilized in vitro with the sperm capacitated by swim up after being cultured for 24 hours in vitro. The cleavage rates after 48 h were 27%, 21%, 60.2%, 69% respectively. Treatment with CIDR+PMSG+FSH had an
 

基金项目：北京市教委资助项目
作者简介：常迪(1985-)，女，硕士研究生，主要从事产科与胚胎工程的研究。Email: sissi_gy@yahoo.com.cn；Tel：010-80799468
*通讯作者：倪和民，副教授，E-mail：:nihemin@yahoo.com.cn
advantage over method of GnRH+FSH and PMSG+FSH（P<0.01）. The blastocyst rates between
6 d and 10 d were 7%, 6.5%, 18%, 13%. Treatment with CIDR+PMSG+FSH had an advantage over method of GnRH+FSH and PMSG+FSH（P<0.01）.Comclusion: These results indicated that cleavage rate and blastula rate could be obviously increase by treatment with CIDR+PMSG+FSH and CIDR+FSH.
Key words: Boer goat lamb; superovulation; IVM; IVF
 
波尔山羊是世界上公认的肉用山羊品种，以生长快、肉质好、繁殖率高、适应性强、性情温顺、好饲养、抗病力强而闻名于世。近些年，波尔山羊在我国得到了大力推广，并对当地羊的改良起到了较好的作用。超数排卵技术可以从母畜卵巢上获得大量卵母细胞，提高繁殖效率，扩大波尔山羊种群。
体外受精技术自1878年发现以来，先后在兔、小鼠、大鼠、人、猪、牛、羊上用体外受精技术生产“试管”动物，并得到成功。和其他家畜相比羊的体外受精技术发展相对较晚，1985年花田章首次报道了用体外受精的方法生产出“试管”羊^[1]。经过20多年的科学研究，羊的体外受精技术有了很大的进步，对幼畜激素诱导后生产胚胎也做了不少研究，并取得了一定的成果。上世纪70年代初，Worthington对5—6周龄的羔羊注射hCG，发现羔羊卵巢上大量卵泡开始发育^[2]。Trounson对10—16周龄青年羔羊的卵母细胞进行体外研究，结果发现其卵母细胞在体外也可以发育到囊胚^[3]。90年代以后，人们对羔羊卵泡的发育进行了更为深入的研究。利用激素诱导获得卵母细胞生产出的早期胚胎，其卵裂率和囊胚率分别能达到63%和20%左右^[4]。
在我国，羊的超数排卵中多采用成年母羊，很少使用羔羊作为胚胎供体。幼畜卵泡发育的研究开始于上个世纪50年代初，通过注射外源促性腺激素，先后在小牛和羔羊上获得超排卵，这一研究进展不仅可以提高动物的繁殖潜能，使卵巢上的卵母细胞得到充分利用,而且还可以大大缩短世代间隔, 加快良种培育进程^[5,6]。
幼畜胚胎体外生产技术,是集幼畜的超数排卵与采卵、卵母细胞体外成熟、体外受精、胚胎体外培养和胚胎移植等技术为一体的生物高技术体系。此技术不仅可以提高动物的繁殖潜能,使正常情况下闲置不用的卵巢卵母细胞资源得到充分利用,而且还可以缩短世代间隔,加速遗传改良进程。此项技术可以使繁育成本下降60%，不仅可以应用到种羊生产，也可以应用到母羊生产，加快基本生产群体繁育速度。其效率是成年绵羊常规胚胎移植的20倍，是自然繁殖的60倍左右。但国内使用羔羊超排并进行体外受精、胚胎生产的报道还不多。
本试验采用不同的超排方法处理波尔山羊羔羊,观察其超排效果,并对获得的卵母细胞进行体外成熟和体外受精的试验，探讨以波尔山羊羔羊作供体进行超数排卵生产卵母细胞的可行性，以及对卵母细胞进行体外成熟和体外受精的效果研究。
 

1. 材料和方法

1.1材料
1.1.1试验时间、地点
    2008年4月北京市顺义区沃德尔羊场
1.1.2试验动物
选取7周龄波尔山羊羔羊16只，体重9—11 kg，分成四个实验组，每组各4只。
1.1.3主要试剂
释放型阴道栓（CIDR新西兰哈密尔顿生物公司）；孕马血清促性腺激素（PMSG 宁波市激素制品有限公司，批号 20070909）；垂体促卵泡素（FSH 中国科学院动物研究所，批号 20020201）；促性腺激素释放激素（GnRH 宁波三生药业有限公司）；葡萄糖、NaCl等无机试剂均为国产优级纯产品，其余药品和试剂均购于Sigma公司。
1.2方法
1.2.1超排方案
Ⅰ.GnRH+FSH：肌肉注射200 IU GnRH，记为第0天，从第1天开始每日注射两次FSH，每次3 mg，连续注射3天，第4天采卵。
Ⅱ.PMSG+FSH：肌肉注射200 IU PMSG，记为第0天，从第1天开始每日注射两次FSH，每次3 mg，连续注射3天，第4天采卵。
Ⅲ.CIDR+PMSG+FSH：按照CIDR（含5 mg孕酮）要求将其放入试验母羊阴道,记为第0天，第3天肌肉注射PMSG 400 IU，第7—9天连续3天每天早晚各注射一次FSH，每次3 mg，第10天撤栓采卵。
Ⅳ.CIDR+FSH：按照CIDR（含5 mg孕酮）要求将其放入试验母羊阴道,记为第0天，第7—9天连续3天每天早晚各注射一次FSH，每次3 mg，第10天撤栓采卵。
1.2.2卵母细胞的采集
采卵液：TCM199＋25mmol/LHEPES＋2.2mg/mLNaHCO3＋2%FCS＋100IU/mL青霉素＋100μg/mL链霉素
用外科手术的方法取出羔羊的卵巢，在天平上称重后，置于37 ℃生理盐水中，在无菌操作台上用剪刀对卵巢进行修剪，剪去多余的脂肪及黄体。在一次性培养皿中倒入少量采卵液，用刀片划破卵泡，在采卵液中释放出卵母细胞。

 1/4    1 2 3 4 下一页 尾页